Introduction
식물의 유전자 조작은 아마도 농경이 시작된 선사 시대부터 지금까지 행하여져 오는 생명공학기술이라고 볼 수 있을 것이다. 아주 오래 전부터 사람들은 식물의 자연적인 교잡 결과 만들어진 가장 좋은 작물로부터 씨앗을 전발하고 유지하여 다음 경작시기에 가장 좋은 작물을 얻으려고 파
Method
M9 plate에서 worm을 S-media(1ml)로 모은 다음 2~3회 washing하고 30min동안 ice에서 bacteria가 모두 소화될 수 있도록 한다.(Bacteria 제거)
한번 더 washing해준다.
5000g에서 30s centrifuge한 후, worm만 남기고 S media는 제거해준다.
2X SDS buffer를 50㎕넣어주고 잘 섞일 수 있도록 pipeting한다
Ⅰ. 전기영동(electophoresis)
-기본적인 개념은 양전하와 음전하는 서로 잡아당긴다는 것이다.
전기적 끌림의 영향으로 더 많은 전하를 가지는 분자는 더 빠르게 움직이지만, 크기가 더 큰 분자를 움직이기 위해선 더 큰 힘을 필요로 한다. 그래서 결과적으로 보면 모든 DNA/RNA 분자들은 같은 속도로 양
2) Transfer
nitrocelluose, PVDF 및 nylone membrane같은 filter에 transfer하는 방법이다. 이렇게 transfer하는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Transfer되는 과정 동안 이동 효율은 분자량에 달려 있는데 분자량이 작은 단백질은 큰 단백질에 비해 효율
cationic 및 anionic detergent로 다시 나뉘며 이들은 highly denaturant로 monomeric protein으로 단백질을 분리시키는 특성이 있어 Westernblot analysis 및 분자량 측정 등에 주로 이용한다. 그리고 Triton X-100과 같은 non-ionic detergent는 less protein denaturant이기 때문에 protein-protein interaction등에 주로 이용된다. 또한 CHAPS 등과
4. Bradford Assay
- Bradford Reagent는 95% ethanol, 88% phosphoric acid, Brilliant Blue G로 이루어져 있다. Ethanol은 유기용매이기 때문에 coomassie blue를 Bradford reagent 내에 잘 용해 시키고, phosphoric acid는 reagent가 산성 조건을 충족시키게 한다. 산성 조건 하에서 Coomassie blue는 doubly-protonated red form이 되기 때문에 6개의 phenyl grou
(1) DNA의 분리와 정제
1) 세포 내 전체 DNA의 분리 정제
A.세균을 배양하여 수거한다.
a.영양분이 골고루 들어있는 액체 배지를 준비한다.
b.LB배지 또는 복합 배지가 적당하다.
B.세포추출물을 위해 세포를 파괴한다.
a.물리적이나 화학적 방법을 사용하여 세균의 막을 분쇄 시킨다.
b.대장균의 경우에
SDS-PAG
SDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.
1) SDS-PAGE에서 단백
1. 응고검사
①Bleeding time :
- 검사명 : 출혈시간(Bleeding time)
- 검사원리 : 피부를 찔러서 출혈시키고 얼마나 빨리 지혈이 되는가를 측정하는 것이다. 따라서 여기는 tissue gluid가 관여하게 되는 피부나 혈관의 견고성 등도 관계되나 가장 깊은 관계가 있는 것은 혈소판의 수와 그 기능이다. 혈소판 감소
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한